产品货号:
GS0152
中文名称:
通用型LAMP试剂盒
英文名称:
2×LAMP MasterMix
产品规格:
40T|200T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒包含建立LAMP反应体系(除引物和模板之外)的所有组分。LAMP是一种新型的核酸等温扩增方法,其广泛应用于细菌,病原微生物,寄生虫以及病毒等的快速检测。与目前广泛应用的real time qPCR技术相比,其需要四到六条模板特异性的引物以及具有链置换活性的DNAPolymerase,在等温条件下1h内完成扩增;扩增产物肉眼可见,或者加入相应的检测染料即可判断是否有扩增产物存在,无需昂贵的荧光定量PCR仪或者电泳设备等;LAMP检测方法具有特异性好,灵敏度高及检测范围广泛等优势,可与real timeqPCR检测技术相媲美。总之,LAMP检测方法由于其特异性好,灵敏度高,反应设备及检测设备价格低廉等广受科研工作者的亲睐,是未来检测技术发展的趋势。
组分 | 40T | 200T |
2×LAMP MasterMix | 0.5mL | 2.5mL |
DNA Polymerase | 20μL | 100μL |
Sterilized ddH2O | 1mL | 5×1mL |
保存:-20℃
- 冰上溶解2×LAMP MasterMix和引物,并充分混匀,然后按照下表建立反应体系:
成分 用量 终浓度 2×Lamp Master Mix 12.5μL 1× FIP (10μM) 2μL 0.8μM BIP (10μM) 2μL 0.8μM Loop F (10μM)(可选) 1μL 0.4μM Loop B (10μM)(可选) 1μL 0.4μM F3 (10μM) 0.5μL 0.2μM B3 (10μM) 0.5μL 0.2μM Template DNA 25~100ng 1~4ng/μL DNA Polymerase 0.5μL 0.16U/μL Sterilized ddH2O 至25μL - - 如果反应产物检测采用钙黄绿素法,需要在反应体系中加入1μL钙黄绿素-Mn2+混合物,并充分混匀;反应体系的建立需要无气溶胶污染的环境进行,否则会造成阴性污染。
- 将上述反应管充分混匀,然后置于65℃水浴锅中保温30~60min。
- 80℃ 10min灭活DNA Polymerase。
- 反应产物可采用下述几种方法进行检测:
- 钙黄绿素检测法:若反应体系中加入钙黄绿素-Mn2+混合物,反应完成之后可以将反应管置于紫外灯下观察,若为亮绿色,说明扩增产物存在;否则表明无扩增。
- 琼脂糖电泳法:取3~5μL扩增产物,1%琼脂糖电泳检测,可见不同大小条带组成的lamp特征图谱;
- 荧光定量实时检测。
- 钙黄绿素检测法:若反应体系中加入钙黄绿素-Mn2+混合物,反应完成之后可以将反应管置于紫外灯下观察,若为亮绿色,说明扩增产物存在;否则表明无扩增。
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